CALU-3人肺腺癌細胞（STR鑒定正確）

名稱：CALU-3 人肺腺癌細胞

種數：人

組織來源：肺，胸水腺癌，轉移灶

細胞形態：上皮細胞樣

生長特性：貼壁細胞

原代細胞、細胞系與細胞株簡單介紹：

    原代細胞(primary cell)是指從機體的組織中經蛋白酶或其它的方法獲得、并在體外進行培養的細胞，稱為原代細胞。一般認為，培養的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。

    細胞系(cell strain)：原代培養物經傳代成功后即為細胞系，由原先存在于原代培養物中的細胞世系所組成。如果不能繼續傳代，或傳代次數有限， 可稱為有限細胞系， 如可以連續培養， 則稱為連續細胞系， 培養50代以上并無限培養下去。

    細胞株(cell line)：通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養物稱為細胞株，也就是說，細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。如果不能繼續傳代或傳代數有限，稱為有限細胞株；如果可以連續傳代，稱為連續細胞株。對于人類腫瘤細胞，在體外培養半年以上，生長穩定的并連續傳代的即可稱為連續性株或系。

現行的人教社大綱版選修教材中是這樣介紹細胞株和細胞系的：原代培養的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細胞的生長就會出現停滯，大部分細胞衰老死亡。但是有極少數的細胞能夠度過“危機”而繼續傳下去，這些存活的細胞一般能夠傳到40--50代，這種傳代細胞叫做細胞株。細胞株的遺傳物質沒有發生改變。當細胞傳至50代以后又會出現“危機”，不能再傳下去。但是有部分細胞的遺傳物質發生了改變，并且帶有癌變的特點，有可能在培養條件下無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱為細胞系。

原代細胞的優勢是細胞的性狀和生物學特性接近于期生理狀態，但其缺點是原代細胞分離困難，生長時間有限。

細胞系或細胞株的優勢是細胞傳得代數較多或無限傳代，較容易培養，但缺點是隨著培養代數的增加，某些細胞的生理性狀可能丟失。

基于如上比較，很多科研工作者會選擇原代細胞從事科研實驗。

CALU-3人肺腺癌細胞（STR鑒定正確）的凍存和復蘇

1. 實驗前準備：細胞室及工作臺紫外線照射15min；培養液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒溫水浴箱37℃預熱備用；收集對數生長期細胞，在凍存前一天換液

2．用吸管吸出培養瓶中的細胞培養液，PBS清洗2遍吸出沖洗液，加入適量胰蛋白酶消化。

3. 適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養液。吸管吸取培養液吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。

4. 用吸管將培養液加入凍存管中，離心(1000r/min，10分鐘)。

5. 去上清液，加入與細胞懸液等量的凍存液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻

6. 冷存管置于4℃10分鐘----20℃30分鐘----80℃16～18小時(或隔夜)---液氮槽vaporphase長期儲存。-20℃不可超過1h，以防止胞內冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

7．記錄每一個冷凍管的位置以確保在以后應用時能夠找到每一個冷凍管。

細胞復蘇

1.室內紫外消毒；培養基、PBS于37℃恒溫水浴預熱備用。

2.自液氮罐中取出冷凍管，立即放入37℃水槽中快速解凍，離心。

3.去上清，加入培養基，吹打，然后移入培養瓶中，用培養基清洗凍存管，清洗液也移入培養瓶中。

4.于培養瓶中加入適量培養基，放入CO2培養箱中培養

5.記錄復蘇日期；次日換液。

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