B16-F10小鼠黑色素瘤高轉細胞（含str）1）來源：詳細資料請咨詢上海文韌生物2）含量：1x106 個/mL3）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性4）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝氣相：空氣，95%；CO2，5%
產品時間：2020-04-03
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廠商性質：經銷商
B16-F10小鼠黑色素瘤高轉細胞（含str）
細胞名稱 | B16-F10小鼠黑色素瘤高轉細胞（含str） |
種屬 | 小鼠 |
細胞來源 | ATCC/中科院/協和醫院等地引進 |
傳代 | 1.用75%酒精噴灑整個培養瓶消毒，將其平躺置于培養箱中進行1-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養ye去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養基(以T25培養瓶為例)并置于細胞培養箱中培養，根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換ye以及傳代，一般2天換一次ye； 2.待細胞長滿瓶底面積80%，需要對其進行傳代，傳代比例為1:2到1:3； 3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化ye置于室溫預熱，倒掉培養瓶中的培養基，往培養瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預熱好的胰酶，置于室溫孵育消化（*次消化需置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為*消化時間，記錄*消化時間，以便于下次消化），消化好后加入3ml*培養基終止消化。用移ye槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后收集細胞懸ye，1000rpm離心3min，棄上清，加入*培養基重懸細胞，進行傳代。（具體根據隨貨說明書進行操作） |
保存 | 凍存條件：*培養基+FBS+DMSO (備注：建議使用本公司的培養條件，用4度保存的冷凍ye直接重懸細胞，不能預熱后使用。) 保存條件：yedan存儲 |
供應限制 | 僅供研究之用 |
常見問題及解決方案 | 1.培養瓶有破裂，培養ye有漏ye：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。 2.收到細胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養基，如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基，請在原瓶培養基中額外添加 10%的血清（原瓶培養基的繼續使用時間長不宜超過 72 小時） 3.細胞漂浮：培養瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。1-2小時后觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留8-10ml培養ye培養觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養ye繼續培養，中間注意觀察， |
如果你使用的細胞已經是很多代之后的了，培養的時候就會力不從心，可以重新復蘇更原始的細胞進行培養。
如果你使用的是凍存的細胞，那就有可能在凍存時該細胞的增殖能力就很弱了，可以通過查看以往的操作記錄來判斷。
還有一點就是個體差異，可以在培養前通過已知的標準對樣本進行篩選，從而減少個體差異帶來的影響。
外源污染
如果相同來源的其它批次的細胞并沒有出現問題，你就要思考一下你是不是“中獎了”。請及時對可疑細胞以及培養使用的試劑進行隔離。
細菌污染
細菌是一種原核細胞微生物，其大小以微米(μm)計。
常見的污染細菌有革蘭氏陰性菌和大腸桿菌、假單胞菌等，革蘭氏陰性菌中白色葡萄球菌等比較常見。
一旦發生細菌污染較易發現，多數情況下培養液短期內顏色變黃，表明有大量酸性物質產生，出現明顯混濁現象；有時靜置的培養液液體初看不混濁，但稍加振蕩，就有很多混濁物漂起。倒置顯微鏡下觀察，可見培養液中有大量圓球狀顆粒漂浮。必要時可取少量培養液涂片染色檢查以證實細菌種類；有的培養液改變不明顯而又疑有污染，可取出少量培養液用普通肉湯接種或用未加雙抗藥物的培養液接種，也可取10ml細胞懸液以100rpm離心5min，沉淀中加入無抗生素的培養液2ml，置于37℃培養，24h可得結果。
污染后細胞發生病理改變，胞內顆粒增多、增粗，后變圓脫落死亡，造成試驗失敗和細胞株(系)丟失。
解決方案：
(1) 丟棄所有已經污染的細胞和培養基；
(2) 培養環境用新潔爾滅擦拭且UV滅菌24小時；
(3) 培養試劑中加入P/S雙抗；
(4) 盡可能使用一次性耗材及成品培養基；
真菌污染
真菌污染是細胞培養過程中很常見的一種，尤其在梅雨季節進行細胞培養更易污染。
污染培養細胞的多為煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。
霉菌污染后多數在培養液中形成白色或淺黃色漂浮物。一般肉眼可見，較易被發現，短期內培養液多不混濁，倒置顯微鏡下可見于細胞之間縱橫交錯穿行的絲狀、管狀、及樹枝狀菌絲，并懸浮飄蕩在培養液中。很多菌絲在高倍鏡可見到有鏈狀排列的菌珠；念珠菌或酵母菌形態呈卵形，散在細胞周邊和細胞之間生長。鏡下看時，要將培養瓶用酒精棉球擦干凈，以防止與瓶外尤其瓶底外面生長的菌絲相混淆。
真菌污染后，細胞生長變慢，但后由于營養耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。
解決方案：
(1) 丟棄所有已經污染的細胞和培養基；
(2) 培養環境用甲醛熏蒸；
(3) 培養試劑中加入兩性霉素B；
(4) 盡可能保持細胞培養環境的干燥；
(5) 注意戴帽子和口罩；
(6) 盡可能使用一次性耗材及成品培養基；
支原體污染
支原體是一種大小介于細菌和病毒之間(小直徑0.2μm并獨立生活的微生物。約有1%可通過濾菌器。支原體無細胞壁形態呈高度多形性．可為圓形、絲狀或梨形。
支原體形態多變，在光境下不易看清內部結構。電鏡下觀察支原體膜為三層結構．其中央有電干密度大的密集顆粒群或絲狀的中心束。支原體多吸附或散在于細胞表面和細胞之間。橫斷面與細胞微絨毛相似，但微絨毛電子密度比支原體小，且中央無顆粒群或中央束。
支原體代謝需固醇類物質、部分種類需要精氨酸、氧氣、葡萄糖，每一種支原體都有自身持點。多數支原體適合于偏堿條件下生存(PH 7.6~8.0)，對酸耐受性差。對熱比較敏感，對一般抗生素不敏感。
支原體污染細胞后．培養液可不發生混濁．多數情況下細胞病理變化輕微或不顯著，細微變化也可由于傳代、換液而緩解．因此易被忽視。但個別嚴重者，可致細胞增殖緩慢．甚至從培養器皿脫落。
解決方案：
(1) 丟棄所有已經污染的細胞和培養基；
(2) 使用支原體清除試劑擦拭培養箱及超凈工作臺；
(3) 培養試劑中加入支原體清除試劑；
(4) 注意戴帽子和口罩；
(5)盡可能使用一次性耗材及成品培養基；
黑膠蟲污染
黑膠蟲可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養液不渾濁，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。數量不多的時候對細胞生長狀態不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。
原蟲污染
培養液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的，但他們的數量小，細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長，終形成惡性循環。
病毒污染
組織細胞培養過程中，如果沒有除去潛在的病毒，就會產生病毒污染。目前，從原代猴腎細胞的培養中已發現不少于20種血清性病毒。 盡管病毒污染的細胞不影響原代培養，但生產疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細胞大量生產和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。
交叉污染
共用試劑、耗材，同時操作不同的樣本，都極易造成交叉污染。交叉污染王應該屬于HeLa細胞了，世界上已有很多細胞都受其污染，致使許多實驗宣告無效。
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