Hyclone胎牛血清熱滅活的三大問題解答
Hyclone胎牛血清說明書
1、瓶轉Hyclone胎牛血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全 部
溶解后再分裝,一般以50m1無菌離心管可分裝40~45m1。在溶解過程 中須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度 與成分均一,堿少沉淀的發生。.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而 出現沉淀。
2、熱滅活是指56*,30分鐘加熱已*解凍的血清, 加熱過程中須規則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體 成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉 淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用,平滑肌細胞收縮,肥大細胞和血小板釋放組胺,增強吞噬作用,促進淋巴細胞和巨噬細胞 發生化學趨化和活化。
3、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些累狀物不會影響血清本身 的質量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下“小黑點”:經過熱處理過的血清,沉淀物 的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象“小黑點”,常誤認為血清受污染。一般情況下,此小黑 點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清。
Hyclone胎牛血清熱滅活的問題:
1、血清熱滅活有必要嗎?
血清熱滅活的步驟在1970年代就已建立,至今成為很多實驗室的常規血清前處理步驟;但許多先前認為必須熱滅活的原因,卻早已經不再成立:
2、熱滅活可以去除支原體污染?
早期Hyclone胎牛血清加工使用的450nm濾膜,早已被100nm濾膜取代;且隨著加工技術的創新及嚴格的監控,血清產品早已沒有支原體污染的疑慮。
3、熱滅活去除補體等對熱敏感的物質?
Hyclone胎牛血清中含有的補體僅為成年牛血清5-50%,而C3 (補體中引起免疫反應的主成分)在胎牛血清中則幾乎不能檢出,直接使用血清對大多數的細胞株沒有負面影響。